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PikoGreen dsDNA定量試劑盒 使用說明書

發(fā)布時間:2017/11/14      點擊次數(shù):1254

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PikoGreen dsDNA定量試劑盒(Broad Range)

產(chǎn)品名稱

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PikoGreen dsDNA定量試劑盒(Broad Range)

D1101L1125

200 assay

4℃

650

 

產(chǎn)品描述

PikoGreen是一種極為靈敏的雙鏈DNA熒光染料,于雙鏈DNA的定量。測定DNA濃度在cDNA文庫構(gòu)建、DNA亞克隆、PCR產(chǎn)物估測等領(lǐng)域中非常重要,另外疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測因關(guān)系人身健康,顯得尤為重要。

相比傳統(tǒng)的方法,Pikogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下優(yōu)勢:①靈敏:數(shù)量級較UV吸光讀數(shù)更敏感,可節(jié)省樣品;②特異性強:只結(jié)合dsDNA,特異性強,不受樣品常規(guī)污染影響。傳統(tǒng)紫外吸光法容易受樣品中存在的單鏈DNA,蛋白,RNA等影響;③耐受性好:耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、CHCl?、去垢劑、蛋白或瓊脂糖,可以直接定量PCR擴增產(chǎn)物而無需從反應(yīng)混合物中純化DNA。④線性范圍寬:PikoGreen dsDNA染料測定DNA濃度,在100pg/ml-100ng/ml范圍內(nèi)呈良好線性;熒光計兼容。⑤容易使用:在樣品中加入染料,等待5-6分鐘染色,然后讀數(shù)即可,且適用于96和384孔板;與大多數(shù)基于熒光的酶標儀和可適用于各種DNA樣品分析,PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復(fù)雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。

PikoGreen僅與DNA雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光,且所產(chǎn)生的熒光與DNA濃度呈正比,在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下,可以選擇性地檢測低至25pg/ml的dsDNA。該分析在四個數(shù)量級范圍內(nèi)呈線性,且?guī)缀鯚o序列依賴性,可以地測量多個來源的DNA,包括基因組DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴增產(chǎn)物。該方法因其穩(wěn)定性、靈敏性,已經(jīng)錄入《中國藥典》。

PikoGreen dsDNA定量試劑盒(Broad Range)(兼容Qubit 3.0)是李記生物研發(fā)的dsDNA定量試劑盒,具有線性dsDNA特異性好、線性范圍寬、操作簡便等特點。

產(chǎn)品組分

PikoGreen dsDNA 定量試劑盒組份(1000 assay)

              A:1×定量緩沖液      250 mL

              B:100×反應(yīng)液         5 mL

              C:100×反應(yīng)增強液   5 mL

              D:dsDNA 標準品    9 x 0.5 mL(0 , 2, 6.25, 12.5 , 25, 50 , 100, 150 and 200 ng/uL)

技術(shù)資料

1. Ex(nm):350

2. Em(nm):460

運輸與保存方法

冰袋運輸。收到貨后-4℃避光干燥保存。如果較長時間不用,建議把TE緩沖液及dsDNA標準品放置于-20℃保存。

使用方法:(以96孔板為例)

1.使用前,將產(chǎn)品從儲存條件下取出恢復(fù)至室溫。PikoGreen提供的是DMSO溶液,在4℃存放時成固體,可37℃水浴溶解。每個組分應(yīng)充分震蕩或渦旋混勻、離心,以免造成不必要的試劑損耗。

2.配制PikoGreen工作液,分別吸取20ml組分A, 200uL組分B, 200uL組分C配制成20ml 1 x Piko Green工作液。新配工作液應(yīng)在1小時內(nèi)使用,工作液重新存放使用時須重懸,以免染料沉淀,工作液存放24小時,會輕微影響定量結(jié)果。

3.每個樣品,吸取200uL的工作液至黑色的96孔板微孔中。為確保結(jié)果可靠,建議每個測試樣品和DNA標樣分別做平行的3個復(fù)孔。黑色的檢測板可以減少各測試樣品間的熒光干擾。

4.96孔板微孔中,分別加入dsDNA標樣或待測樣品各10 uL,并用移液器輕輕混勻。

5.將微孔板室溫避光孵育10分鐘,在Ex(nm):350,  Em(nm):460處用酶標儀測量熒光值。

6.制作標準曲線,計算樣品濃度。

注意:

1.為了得到*結(jié)果,請使用校準的移液器和去RNA酶的槍頭、試管以及檢測板。

2.建議檢測時每個DNA標樣和未知樣品都設(shè)定3個復(fù)孔。如果檢測時不只一塊96孔板,建議每塊96孔板都設(shè)定一條標準曲線,盡量減少檢測板之間的誤差。

3.為得到*結(jié)果,檢測板應(yīng)在一小時內(nèi)讀取完畢。如果將反應(yīng)液重新儲存并在24小時內(nèi)讀取數(shù)據(jù),結(jié)果的性會有輕微損失。

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